層析冷柜原理
層析冷柜在實驗室領域為反相層析，親和層析提供試驗環(huán)境。
親和層析是物分子間存在很多特異性的相互作用，它們之間都能夠專一而可逆的結合，這種結合力就稱為親和力。親和層析就是通過將具有親和力的兩個分子，中一個固定在不溶性基質上，利用分子間親和力的特異性和可逆性，對另一個分子進行分離純化。被固定在基質上的分子稱為配體，配體和基質是共價結合的，構成親和層析的固定相，稱為親和吸附劑。親和層析時首先選擇與待分離的生物大分子有親和力物質作為配體，并將配體共價結合在適當?shù)牟蝗苄曰|上。將制備的親和吸附劑裝柱平衡，當樣品溶液通過親和層析柱的時候，待分離的生物分子就與配體發(fā)生特異性的結合，從而留在固定相上；而其它雜質不能與配體結合，仍在流動相中，并隨洗脫液流出，這樣層析柱中就只有待分離的生物分子。通過適當?shù)南疵撘簩⑵鋸呐潴w上洗脫下來，就得到了純化的待分離物質。
反向層析是在吸附層析中，高極性物質在層析柱上吸附較牢，洗脫時發(fā)生拖尾現(xiàn)象和保留時間長的問題。如果在支持物上涂上一層高碳原子的疏水性強的烷烴類，洗脫液用極性強的溶劑，如甲醇和水的混合物。則被分離樣品中的極性強的物質不被吸附，最先洗下來，得到較好的分離效果。這種層析法與普通的吸附層析法相反，故稱為反相層析。目前用HPLC做反相層析常用的ODS柱，即在支持物的表面上連接了C18H37Si—基團。
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